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三种牛胚胎解冻方法
作者:    发布于:2016-11-23 11:03:57    文字:【】【】【

胚胎移植是牛人工繁殖的方法之一,采用这种繁殖方法必须知道牛胚胎解冻的方法,根据胚胎冷冻液的不同,牛胚胎解冻方法也不尽相同,常用的有以下三种解冻方法。

1、此法用于以10%甘油冷冻液作冷冻保护剂的冷冻胚胎的解冻,操作者应戴上保护镜,将胚胎从液氮中取出,在空气中停留5~10s,用柔软的手纸擦去细管外的冻霜,然后投入30℃水浴中10s进行解冻,取出细管,用柔软的手纸擦干细管,剪去封口或移去细管塞。

采用三步法脱甘油:第一步,将细管内的胚胎移入1/3解冻液+2/3冷冻液中平衡5~7min;第二步,将胚胎移入1/3解冻液+1/3冷冻液+1/3保存液中平衡5~7min;第三步,将胚胎移入1/3解冻液+2/3保存液中平衡5~7min。

用保存液将胚胎再清洗2~3次,进行质量评定,将质量好的胚胎按保存液~空气~保存液+胚胎~空气~保存液的顺序装入细管内,再将装有胚胎的细管装入移胚枪待移。

2、此法用于以1.5mol/l乙二醇冷冻保护液作冷冻保护剂的冷冻胚胎的解冻法,又称直接解冻移植法。

操作者应戴上保护镜,将胚胎从液氮中取出,在空气中停留5~10s,用柔软的手纸擦去细管外的冻霜,然后投入30℃水浴中10s进行解冻,取出细管,用柔软的手纸擦干细管,剪去封口或移去细管塞,将细管装入移胚枪待移。

3、从液氨中取出OPS,在空气中停留3s,细管粗端口不能指向操作者自己或其他人员,以免液氮溅出伤人,接着用食指封住细管粗端口,细端口宣接浸入30℃预热好的解冻液中,使细管与解冻液面夹角为30~45°,细管内的冷冻液及胚胎因管内空气受热膨胀的力量而排出到解冻液中,1min后将胚胎捡出,移人WM2中(1mL/孔),平衡1min,然后将胚胎移入基础操作液(HM),停留5min,再将胚胎用HM清洗2~3次。

进行胚胎质量评定,将质量好的胚胎按基础操作液~空气~基础操作液+胚胎~空气~基础操作液的顺序装入细管内,再将装有胚胎的细管装入移胚枪待移。

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